重組膠原蛋白成分檢測，“方法學(xué)驗證”是把金鑰匙
隨著護(hù)膚場景及需求的日益增長，消費(fèi)者對護(hù)膚品的關(guān)注點已從基礎(chǔ)護(hù)理逐步轉(zhuǎn)向功效實現(xiàn)，產(chǎn)品實際有效性也更受大眾關(guān)注。重組膠原蛋白是采用合成物學(xué)方法制造的一類生物活性成分，近些年來在敷料和護(hù)膚品等領(lǐng)域應(yīng)用越來越廣泛。近期，圍繞重組膠原蛋白成分檢測的方法與結(jié)果可信度引發(fā)了廣泛討論，眾多專業(yè)人士自發(fā)選品檢測，檢測方法各有論點。那么，究竟如何科學(xué)檢測，其結(jié)果才具有足夠的科學(xué)說服力和行業(yè)公信力？
多方權(quán)威深入探討
揭示重組膠原蛋白成分檢測核心難題
5月30日，中國生物工程學(xué)會科創(chuàng)中國工作委員會聯(lián)合昌平合成生物制造轉(zhuǎn)化加速中心舉辦了“復(fù)雜基質(zhì)中重組膠原蛋白檢測方法”研討會。會中，生物醫(yī)藥、分析檢測、材料科學(xué)等多領(lǐng)域?qū)＜揖劢箯?fù)雜基質(zhì)中重組膠原蛋白的分離與純化技術(shù)挑戰(zhàn)、高靈敏度及高特異性檢測方法的開發(fā)與驗證、標(biāo)準(zhǔn)化檢測體系的建立與行業(yè)監(jiān)管需求等主題，解析技術(shù)難點，分享實踐經(jīng)驗，并為檢測技術(shù)的優(yōu)化與相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的制定提供建議。
圖： “復(fù)雜基質(zhì)中重組膠原蛋白檢測方法”研討會
國家蛋白質(zhì)科學(xué)中心研究員賈辰熙表示，化妝品中的重組膠原蛋白檢測相較于敷料類醫(yī)療器械和生物樣本更為復(fù)雜。化妝品中添加了植物提取物、蛋白質(zhì)、多糖、脂類、表面活性劑及色素等多種成分，會嚴(yán)重干擾膠原蛋白信號，導(dǎo)致檢測時其信號較弱。同時，化妝品中膠原蛋白添加量通常較低，對低濃度物質(zhì)進(jìn)行定量檢測難度大。
成分檢測沒有“萬能鑰匙”
方法學(xué)驗證是關(guān)鍵
目前，針對復(fù)雜基質(zhì)中重組膠原蛋白的檢測方法尚未出臺國家統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。中國科學(xué)院過程工程研究所研究員張貴鋒介紹，蛋白檢測方法主要有凱氏定氮法、雙縮脲法、考馬斯亮藍(lán)法、福林酚法、BCA法及特征多肽法等。
圖：張貴鋒教授做《復(fù)雜基質(zhì)樣品中重組膠原蛋白的檢測方法》主題報告
對于不同的檢測方法，與會嘉賓紛紛表示，不同的檢測方法各有特點，均有其適配的應(yīng)用場景，無關(guān)新舊，關(guān)鍵是要根據(jù)不同基質(zhì)，建立樣品前處理方法，有效排除基質(zhì)的干擾，選擇和建立針對復(fù)雜基質(zhì)的檢測方法，并通過方法學(xué)驗證其檢出限、定量限、線性、精密度、準(zhǔn)確性及檢測回收率。
清華大學(xué)化學(xué)系教授、中國科學(xué)院院士李景虹解釋說，復(fù)雜基質(zhì)中重組膠原蛋白的分子檢測存在降解過程復(fù)雜等難點，不能選用單一的檢測方法，需根據(jù)不同蛋白的差異性選擇相應(yīng)的檢測方法，并對不同類型重組膠原蛋白的不同氨基酸序列、結(jié)構(gòu)包括動態(tài)變化和相互作用進(jìn)行研究和驗證。
中國食品藥品檢定研究院研究員徐麗明介紹，重組膠原蛋白產(chǎn)品中的復(fù)雜基質(zhì)是影響成分檢測的重要因素。現(xiàn)行的標(biāo)準(zhǔn)化檢測方法主要針對純蛋白質(zhì)樣品，測定方法在復(fù)雜基質(zhì)中進(jìn)行套用時，需考慮基質(zhì)影響，做好樣品前處理方法研究和驗證。“當(dāng)復(fù)雜基質(zhì)導(dǎo)致重組膠原蛋白成分提取困難時，需要研究基質(zhì)存在情況下的前處理方法，并確保定量用標(biāo)品和供試品是相同的檢測條件（基質(zhì)環(huán)境），如基質(zhì)加標(biāo)的方式，且需通過多種方法進(jìn)行相互驗證。”
北京師范大學(xué)化學(xué)學(xué)院教授閆東鵬指出，為了排除干擾，提高檢測的準(zhǔn)確性，需要提供重組膠原蛋白產(chǎn)品前處理的方法，根據(jù)不同應(yīng)用場景、不同研究體系，采用不同方法進(jìn)行優(yōu)勢互補(bǔ)。
針對復(fù)雜基質(zhì)中重組膠原蛋白的檢測方法，徐麗明建議，可以采用多種方法進(jìn)行考察，比如雙縮脲法和氨基酸法等，但是也需進(jìn)行充分驗證。“雙縮脲法是在行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)里列出的一個方法，但是在復(fù)雜基質(zhì)里使用要進(jìn)行充分的方法學(xué)驗證。氨基酸法是把重組膠原蛋白水解成氨基酸，存在氨基酸水解效率的問題，還有檢測器靈敏度的問題，同樣需要進(jìn)行方法學(xué)驗證，另外還要考慮如何去除復(fù)雜基質(zhì)的干擾問題。”
她強(qiáng)調(diào)，只有建立了方法學(xué)驗證后的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)才能確保檢測結(jié)果的可信性。
成分檢測亟需標(biāo)準(zhǔn)
共促行業(yè)有序發(fā)展
值得關(guān)注的是，對重組膠原蛋白進(jìn)行準(zhǔn)確檢測是一個高度復(fù)雜的過程，特別是在護(hù)膚品成分這類“復(fù)雜基質(zhì)”中，未經(jīng)完整鏈路的檢測驗證，其數(shù)據(jù)往往缺乏參考價值。 正因如此，行業(yè)亟需凝聚多方力量，共同推動科學(xué)、統(tǒng)一的國家標(biāo)準(zhǔn)的建立與出臺，有效規(guī)避因檢測標(biāo)準(zhǔn)缺失而導(dǎo)致的功效成分含量不明確等問題，保障消費(fèi)者權(quán)益，并最終助力重組膠原蛋白產(chǎn)業(yè)健康、可持續(xù)發(fā)展。
*數(shù)據(jù)引自新華網(wǎng)報道研討會專家共識
